|
|
S-a dovedit caracterul optim şi durabil al bioproducţiei glucanice la tulpinile submerse de Claviceps purpurea T37.1 şi T 14.1, care au fost selectate şi ameliorat anterior. Repicarea succesivă, necesară obţinerii culturilor nu a afectat randamentul biosintezei glucanice a tulpinilor selectate. Stabilitatea lor funcţională s-a menţinut pe o perioadă îndelunagată. Analizele fizice şi chimice de înaltă calitate şi precizie a biopreparatelor glucanice a permis caracterizarea lor finală ca biomolecule glicoproteice, acestea având în compoziţie atât structuri glucanice, cât şi proteice.Investigările in vitro, pe culturi de celule tumorale tratate cu extractele exopolizaharidice EGlCP 37.1 şi EGlCP 14.1 au permis evidenţierea, confirmarea si cuantificarea proprietăţilor citostatice şi citotoxice ale biopreparatelor de glucani, efectele fiind exprimate de perturbarea proteinosintezei celulelor tumorale; de sensul negativ al variaţiei numărului total de celule în decursul evoluţiei culturilor neoplazice, ce semnalează impactul lor antiproliferativ; de scăderea viabilităţii celulelor HeLa şi HEp-2p şi de inhibarea semnificativă a dezvoltării culturilor celulare; de perturbarea proceselor membranare (înregistrarea unei hiperpolarizări membranare ca o consecinţă, probabilă, a complementarităţii efectelor agentului bioactiv asupra activităţii pompelor electrogene de Ca2+, Na+ şi K+: de represare a Ca2+–ATP-azei membranare şi, deci, de inhibare a influxului calcic intracelular; de stimulare a Na+–K+–ATP-azei membranare urmată de creşterea efluxului de Na+; modificarea valorică a potenţialului membranar de repaus al celulelor neoplazice) si de modificările metabolice (alterarea biochimismului metabolismului protidic, glucidic şi lipidic, concretizată prin inhibarea biosintezei proteinelor solubile, insolubile şi, implicit, totale, prin glicogenoliză şi lipoliză, prin acumularea intracelulară crescută de acizi graşi liberi şi prin intensificarea consumului intracelular de aminoacizi, glucoză, acid lactic, nu pe o cale anabolică ci probabil catabolică; perturbarea, în sens inhibitor şi de mare amplitudine a biosintezei acizilor nucleici, cu repercusiuni cantitative şi calitative asupra acizilor nucleici totali; exacerbarea procesului de respiraţie a celulelor tumorale, exprimată prin creşterea consumului de oxigen în unitate de timp, deci prin energogeneză celulară crescută, susţinută şi de nivelele intracelulare scăzute de metaboliţi glucidici, protidici şi lipidici) ale celulelor tumorale. Caracterizarea farmacologică, preclinică, a unui biopreparat glucanic ca potenţial agent chimioterapeutic antitumoral, a fost posibilă în urma investigărilor in vivo, pe animale agresate de neoplasmul experimental, cercetările realizându-se în etape succesive, intercondiţionante.În contextul evaluării calitative, ce impune evidenţierea impactului antitumoral şi dovedirea reproductibilităţii şi stabilităţii efectului antineoplazic al unui nou potenţial agent oncochimioterapeutic, cercetările realizate pe şobolani albi Wistar purtători de diferite sisteme tumorale experimentale de tip solid, s-au soldat, la sfârşitul tratamentului glucanic, cu înregistrarea unor mase tumorale medii semnificativ reduse, care au stat la baza estimării unor regresii tumorale medii semnificative statistic şi ale unor raporturi T/C scăzute, indicii de evaluare argumentând semnificativa proprietate antineoplazică a unor biopreparate glucanice. Experimentările de testare succesivă, în aceleaşi condiţii experimentale, au reconfirmat capacitatea unor extracte glucanice naturale de a se comporta ca nişte veritabili agenţi anticanceroşi, efectul lor citostatic fiind reproductibil şi stabil in timp.Rezultatele acestei prime faze de screening preclinic in vivo au condiţionat trecerea la următoarea fază de evaluare cantitativă a efectului farmacodinamic antitumoral, ce asigură estimarea eficienţei terapeutice a chimioterapiei glucanice în funcţie de doza de tratament, în raport de potenţialul antineoplazic al unor citostatice de referinţă, de uz clinic şi de gradul de dezvoltare tumorală. Testările corespunzătoare au permis dovedirea existenţei unei reale, direct proporţionale şi, probabil limitate, relaţii între doza terapeutică şi intensitatea efectului său tumorosupresor, ce permite optimizarea impactului antitumoral prin manipularea dozelor de tratament. Analiza comparativă a potenţialului antineoplazic al agentului glucanic citostatic activ, asupra procesului de dezvoltare a epiteliomului limfotrop Guérin T-8 sau a carcinosarcomului Walker 256, cu cel al unor oncostatice standard, de uz clinic (metotrexat, ciclofosfamidă, melfalan şi 5-fluoruracil), în condiţiile experimentărilor de laborator, a relevat: o eficacitate terapeutică experimentală semnificativă a agentului glucanic fungal, impactul tumorosupresor indus fiind similar, apropiat şi chiar mai accentuat decât potenţialul antitumoral al agenţilor oncochimioterapeutici de referinţă. Introducerea, de către noi, a unei etape suplimentare de trial preclinic, destinată aprecierii eficienţei antitumorale a unor biopreparate prin prisma acţiunii asupra unor tumori cu diferite grade de dezvoltare, a confirmat proprietatea antitumorală a produsului glucanic autohton EGlCP 37.1, relevând totodată relaţia invers proporţională între eficienţa tratamentului antineoplazic şi gradul de dezvoltare a tumorilor. Asocierea, întrun alt model experimental, a agentului glucanic cu citostatice standard de uz curent, a evidenţiat oportunitatea acesteia pentru optimizarea eficienţei lor antineoplazice, în cadrul unor scheme de oncopolichimioterapie experimentală. In cadrul unei alte direcţii de cercetare abordată ăn prezentul proiect, ne- am propus să investigăm interferenţa chimioterapiei glucanice cu funcţionalitatea sistemului imunitar al organismului animal sănătos sau agresat de neoplasm. Administrrarea, prin injectare intraperitoneală sau prin tubaj intragastric, a extractului exopolizaharidic fungal bioactiv s-a concretizat prin: creşterea proteinemiei şi globulinemiei plasmatice; diminuarea raportului albumine/globuline plasmatice; concentraţii crescute ale proteinelor totale, solubile, insolubile (în mult mai mică măsură) şi ale globulinelor splenice; creşterea sintezei de ARN şi ADN la nivel splenic şi timic; hepato-, spleno- şi timomegalia funcţională; augmentarea cantitativă a complementului seric CH50; nivelul ridicat de complexe imune circulante; leucocitoza şi creşteri numerice ale diverselor populaţii leucocitare (limfocite, monocite, polimorfonucleare, eozinofile şi bazofile) decelate. Datele plaseazâ acest extract natural autohton în categoria agenţilor imunomodulatori, mei precis imunostimulatori sau imunoceutici, ce activează atât mecanismul umoral cât şi cel celular. Această apreciere preliminară se bazează pe înregistrarea unor variaţii ale indicilor biochimici plasmatici şi tisulari, ale greutăţilor splinei, timusului şi ficatului – organe cu semnificaţie majoră în economia generală a imunităţii mediată umoral sau celular –, ale parametrilor hematologici leucocitari, ale indicilor imunologici umorali. Sensul, amplitudinea şi semnificaţia acestora s-a dovedit a fi dependentă de starea de sănătate a animalului, de modul de administrare al agentului biologic activ. Astfel, administrarea biopreparatului polizaharidic fungal, a determinat activarea sistemului imun al animalelor sănătoase sau purtătoare de tumoră, această apreciere fiind relevată de superioritatea potenţialului imunostimulator al EGlClp 37.1 faţă de cel al rodilemidului, un preparat imunostimulator standard, de uz clinic. În sfârşit, un ultim aspect experimental urmarit in vivo, pe şoblani Wistar sănătoşi, şi - a propus evaluarea preliminară şi parţială a capacităţii biopreparatelor glucanice de se comporta ca suplimente nutritive. Pe modele experimentale adecvate, s-a stabilit că administrarea prin tubaj intragastric a extractului exopolizaharidic EGlCp 37.1 a condiţionat modularea benefică a dinamicii ponderostatului animalelor de experienţă, a greutăţii viscerale medii finale, a tabloului hematologic (imprimat de numărul mediu eritrocitar şi respectiv leucocitar, de valoarea medie a hematocritului şi de concentraţia medie a hemoglobinei), a unor constante biochimice plasmatice (proteinemia, albuminemia, globulinemia, raportul albumine/globuline, glicemia, lactacidemia, lipemia, colesterolemia şi nivelul acizilor graşi liberi). Sensul şi amplitudinea variaţiilor acestor parametri fiziologici reflectă interacţiunea pozitivă a macromoleculelor glucanice – contaminate şi de diverse vitamine, săruri minerale - cu procesele biologice celulare, consecinţele acesteia repercutându-se asupra starii generale bune a animalului de experienţă. Dacă reamintim că noul preparat glucanic autohton de natură fungică are şi o valenţă imunoceutică, putem aprecia fără rezervă că acest extract natural întruneşte calităţile unui supliment nutritiv, mai ales că noi am semnalat şi capabilităţi hipoglicemiante şi normolipemiante .Evidenţierea, confirmarea şi cuantificarea efectelor farmacodinamice antitumorale, imunostimulatoare, de supliment nutritiv, în condiţiile experimentului de laborator pe şobolani albi Wistar sănătoşi sau purtători de linii tumorle indusă experimentale – au impus şi abordarea unor studii clinic-veterinare de verificare a acestui potenţial terapeutic. Astfel, cercetările clinic veterinare, efectuate pe animale de companie agresate de neoplasm sau pe pui broiler de gaina sanatosi, de importanţă zootehnică majoră, reconfirmă caracterul real al acestor proprietăţi chimioterapeutice. Întro ultimă etapă, de asemenea s-a demonstrat că asocierea extractului glucanic, care a fost inclus întrun unguent de bază, administrat local, zilnic, cu diferite biopreparate antibiotice şi antiseptice a fost mai eficient în tratamentul piodermitelor fiind un adjuvant preţios al antibioterapiei. Efectele farmacodinamice semnalate se dovedesc cu atât mai importante cu cât nou glucanic autohton un grad scăzut de toxicitate asupra celulelor normale ale animalelor sănătoase sau bolnave, experimentale sau de importanţă veterinară.
|
|
|
|
