Etapa I / 2008: Obţinerea, selecţia şi perpetuarea tulpinilor de Claviceps purpurea prin biotehnologii de hibridare somatica intraspecifica. Screening preliminar pentru testarea efectului citostatic

Termen predare: 15.12.2008

Valoare: 110895 lei

Activitate I.1 Studiu documentar actualizat asupra speciei Claviceps purpurea, sursa de principii active cu efecte biologice multiple .

Executant: CO, P1, P2, P3

Categoria de activitate: A.1.1, A.2.1

Activitate I.2 Obtinerea de tulpini cu potential optimizat de biosinteza alcaloidica prin utilizarea unor biotehnologii de hibridare somatica parasexuala

Executant: CO

Categoria de activitate: A.2.2, A.2.3, A.2.5, A.2.6. 

Activitate I.3 Selecţia şi perpetuarea tulpinilor hibride prin cultivare in regim submers, care sa permita exprimarea potenţialului biosintetic al acestora.

Executant: CO

Categoria de activitate: A.2.1, A.2.5, A2.7  

Activitate I.4. Evaluarea calitatii materialului biologic (lichid de cultura si extracte miceliene brute), prin cuantificarea indicatorilor biochimici: alcaloizi, acizi nucleici, proteine solubile, glucide reducatoare (monoglucide, diglucide, poliglucide solubile, poliglucide insolubile) şi lipide totale.

Executant: CO, P2

Categoria de activitate: A.2.1 

Activitate I.5 Evaluarea in vitro a efectului citostatic al materialului biologic testat pe linii celulare normale si tumorale – criteriu esenţial pentru sceening-ul preliminar al tulpinilor de Claviceps purpurea producatoare de principii bioactive.

Executant: CO

Categoria de activitate: A.1.2, A.2.1, A.2.5, A.2.6. 

Activitate I.6 Fracţionarea preliminara cu solvenţi de polaritaţi diferite (in funcţie de gradul de hidro/lipofilie) a materialului biologic cu efecte citostatice, in vederea stabilirii si optimizarii protocolului de identificare a componentelor bioactive.

Executant: P1

Categoria de activitate: A.2.1. 

Activitate I.7 Diseminarea rezultatelor prin comunicari şi publicari in reviste de specialitate, participari la manifestari ştiinţifice

Executant: CO, P2

Categoria de activitate: B.2, B.3. 

Etapa II/2009: Caracterizarea la nivel chimic, biochimic, molecular si celular a materialului biologic de varste diferite, in vederea identificarii momentului optim de valorificare

Termen predare: 10.07.2009

Valoare: 270000 lei 

Activitatea II.1 Asigurarea continuitaţii in furnizarea materialului biologic, prin cultivarea submersa a tulpinilor hibride de Claviceps purpurea.  Menţinerea vigorii hibride a tulpinilor prin cultivare in vivo.

Executant: CO.

Categoria de activitate: A2.5, A.2.6, A.2.7. 

Activitatea II.2 Caracterizarea biochimica primara, in dinamica, a materialului biologic utilizand indicatorii stabiliti in etapa anterioara, pentru identificarea momentului optim de obtinere a extractelor potential citostatice.

Executant: CO, P2.

Categoria de activitate:  A.2.1, A2.5. 

Activitatea II.3. Cuantificarea continutului de alcaloizi in dinamica dezvoltarii culturii corelat cu nivelul ARNm al expresiei genei cpd1 pentru dimetil-alil- triptofansintaza - DMATS, enzima cheie din calea metabolica de biosinteza a produsilor ergolinici.

Executant: CO, P2.

Categoria de activitate: A.2.1, A2.5. 

Activitatea II.4. Evaluarea cantitativa (Bradford) şi calitativa (SDS-PAGE) a proteinelor totale in timpul cultivarii submerse a culturilor, in vederea decelarii celor potential citostatice

Executant: CO, P2.

Categoria de activitate: A.2.1. 

Activitatea II.5. Testarea in vitro a efectului citostatic si citotoxic al extractelor fungale obţinute din culturi de varste diferite pentru a stabili durata optima de cultivare submersa.

Executant: CO.

Categoria de activitate: A.2.1.A.1.2., A.2.1., A.2.2., A.2.6. 

Activitatea II.6. Fracţionarea cu solvenţi de polaritaţi diferite (in funcţie de gradul de hidro/lipofilie) a materialului biologic cu efecte citostatice, in vederea stabilirii si optimizarii protocolului de identificare a componentelor bioactive.

Executant: P1.

Categoria de activitate: A.2.1.,  A.2.5. 

Activitatea II.7. Diseminarea rezultatelor prin comunicari şi publicari in reviste de specialitate, participari la manifestari ştiinţifice, vizita de lucru/schimb de buna practica

Executant: CO, P1, P2.

Categoria de activitate: B.2, B.3, B.7. 

Etapa III/2009 Optimizarea procesului de fermentaţie in condiţii de micropilot. Fracţionarea extractelor bioactive şi identificarea componentelor citostatic active prin prescreening-ul in vitro pe diferite tipuri de culturi celulare.

Termen predare: 15.12.2009

Valoare: 200813 lei 

Activitatea III.1 Stabilirea parametrilor de cultivare in condiţii de micropilot a tulpinilor hibride selectate. Asigurarea materialului biologic necesar partenerilor pentru activitaţile prevazute.

Executant: CO, P2.

Categoria de activitate: A1.2, A.2.2., A.2.5, A2.6. 

Activitate III.2 Evaluarea in dinamica a parametrilor biochimici si activitatea genei cpd1 pentru culturi obţinute in micropilot, in vederea detectarii momentului optim de prelevare a culturii.

Executant: CO, P2.

Categoria de activitate:  A.2.1. 

Activitatea III.3. Fracţionarea cu solvenţi de polaritaţi diferite (in funcţie de gradul de hidro/lipofilie) a materialului biologic cu efecte citostatice, in scopul identificarii componentelor bioactive

Executant: P1.

Categoria de activitate:  A.2.1., A.2.2, A.2.5, A.2.6. 

Activitatea III.4. Evidentierea, confirmarea si cuantificarea proprietaţii citostatice şi efectelor in vitro ale extractelor fungale obţinute in micropilot şi ale fracţiunilor separate, prin semnalarea impactului lor inhibitor asupra proteinosintezei, mitozei, viabilitatii celulare si dezvoltarii de celule normale si tumorale.

Executant: CO.

Categoria de activitate:  A.2.1. 

Activitatea III.5. Diseminarea rezultatelor prin comunicari şi publicari in reviste de specialitate, participari la manifestari ştiinţifice.

Executant: CO. P1, P2

Categoria de activitate: B.2, B.3. 

Etapa IV/2010. Stabilirea parametrilor de cultivare in conditii de micropilot si de conservare a materialului biologic. Izolarea fractiunii/fractiunilor bioactive si evaluarea farmacologica preclinica in vivo a proprietatii tumorosupresoare.

Termen predare: 10.07.2010

Valoare: 354000 lei

Activitatea IV.1. Cultivarea in conditii de micropilot a tulpinilor ameliorate de Claviceps purpurea in vederea obţinerii de biopreparate citostatic active. Asigurarea materialului biologic necesar experimentelor.

Executant: CO.

Categoria de activitate: A.2.7 . 

Activitatea IV.2. Stabilirea condiţiilor de conservare a materialului biologic prin congelare şi liofilizare. Verificarea viabilitaţii şi potenţialului biosintetic in vivo (pe planta gazda) si in vitro a materialului biologic in conserv.

Executant: CO, P2.

Categoria de activitate: A.2.2., A.2.1, A.2.7 . 

Activitatea IV.3. Izolarea fracţiunii/fracţiunilor active cu proprietaţi citostatice din materialul biologic obţinut in micropilot.

Executant: P1.

Categoria de activitate: A.3.5.  

Activitatea IV.4. Evaluarea farmacologica preclinica in vivo, pe purtatori de diverse sisteme tumorale experimentale si clinic-veterinara, pe animale cu tumori spontane a efectului farmacodinamic al diverselor biopreparate, prin evidentierea si confirmarea proprietaţii lor tumorosupresoare.

Executant: CO, P3.

Categoria de activitate: A.2.1., A.2.2, A2.6, A2.7. 

Activitatea IV.5. Diseminarea rezultatelor prin comunicari si publicarea lor in reviste de specialitate, participari la manifestari stiintifice,

Executant: CO, P1, P2, P3.

Categoria de activitate: B.2, B.3.  

Etapa V/2010. Evaluarea microbiologica, biochimica si farmacologica a calitatii materialului biologic conservat, prin testari in vitro şi in vivo ale efectului farmacodinamic. Caracterizarea profilului chimic al fracţiunilor bioactive.

Termen predare: 15.12.2010

Valoare: 320302 lei

Activitatea V.1. Evaluarea stabilitaţii materialului biologic conservat prin congelare şi liofilizare şi testarea proprietaţilor citostatice pe linii celulare. Asigurarea materialului biologic pentru desfaşurarea experimentelor.

Executant: CO, P1, P3.

Categoria de activitate: A2.1, A2.6, A2.7. 

Activitatea V.2. Testarea in vitro si in vivo a stabilitatii efectului citostatic pentru demonstrarea potentialului antineoplazic al biopreparatelor mentinute in conserv

Executant: CO.

Categoria de activitate: A2.1, A2.5, A2.7. 

Activitatea V.3. Realizarea profilului chimic al fracţiunilor care au indus raspuns antitumoral.

Executant: P1.

Categoria de activitate: A2.1. 

Activitatea V.4. Evaluarea farmacologica preclinica in vivo, pe purtatori de diverse sisteme tumorale experimentale si clinic veterinara pe animale cu tumori spontane a eficientei oncochimioterapiei experimentale, prin dovedirea existentei relatiei doza-efect, prin comparare cu potentialul terapeutic al unor citostatice standard, de uz clinic, si prin estimarea impactului antineoplazic asupra tumorilor cu diferite grade de dezvoltare.

Executant: CO, P3.

Categoria de activitate: A2.1, A.3.6. 

Activitatea V.5. Diseminarea rezultatelor prin comunicari şi publicarea lor in reviste de specialitate, participari la manifestari ştiinţifice

Executant: CO, P1, P3.

Categoria de activitate: B.2, B.3. 

Etapa VI/2011: Stabilirea mecanismului de actiune implicat in exprimarea efectului farmacodinamic. Elaborarea biotehnologiei de obtinere a unor produsi de uz veterinar si caracterizarea complexa a acestora

Termen predare: 30.09.2011

Valoare: 743990 lei

Activitatea VI.1. Biocompatibilitatea organismelor animale sanatoase sau agresate de neoplasm experimental la tratamentul cu biopreparate bioactive obtinute din Claviceps purpurea.

Executant: CO, P1, P3.

Categoria de activitate: A.2.1., A.2.5, A.2.6., A.2.7. 

Activitatea VI.2. Decelarea substratului celular, subcelular si molecular al interactiunii acestor compusi citostatici cu celulele sanatoase sau tumorale si stabilirea mecanismului de actiune implicat in exprimarea efectului farmacodinamic.

Executant: CO, P1, P3.

Categoria de activitate: A.2.1., A.2.5, A.2.6., A.2.7. 

Activitatea VI.3. Elaborarea biotehnologiei de obtinere a unor compusi bioactivi, utilizand tulpini de Claviceps purpurea create prin hibridare parasexuala. Caracterizarea chimica si farmacologica finala a unor noi potentiali agenti oncochiomioterapici cu utilizare initiala in clinica veterinara.

Executant: CO, P1, P2, P3.

Categoria de activitate: A3.1, A.3.3, A.3.5, A.3.6.. 

Activitatea VI.4. Diseminarea rezultatelor prin comunicari si publicarea lor in reviste de specialitate, participari la manifestari stiintifice si elaborarea unui brevet

Executant: CO, P1, P2, P3.

Categoria de activitate: B.1, B2, B.3.